細(xì)胞因子檢測(cè)的常見免疫學(xué)技術(shù)有哪些？

　　細(xì)胞因子，是一類由免疫細(xì)胞和某些非免疫細(xì)胞（內(nèi)皮細(xì)胞、表皮細(xì)胞、纖維母細(xì)胞等）在受到刺激后合成和分泌的小分子蛋白質(zhì)，具有廣泛的生物學(xué)活性，通過結(jié)合相應(yīng)受體，調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、凋亡、傷口愈合、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和穩(wěn)態(tài)平衡。研究細(xì)胞因子為臨床上疾病的預(yù)防、診斷、機(jī)理研究以及治療奠定了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)，其應(yīng)用前景廣泛。那么你知道細(xì)胞因子檢測(cè)的常見免疫學(xué)技術(shù)有什么嗎？讓我們一起來看看吧！

　　一、傳統(tǒng)Western Blot

　　傳統(tǒng)蛋白質(zhì)免疫印跡法（Western Blot，WB）是一種常見的蛋白質(zhì)免疫分析技術(shù)，被應(yīng)用于確認(rèn)特定蛋白質(zhì)的存在并進(jìn)行定性和半定量分析。WB實(shí)驗(yàn)基于抗原抗體特異性反應(yīng)，經(jīng)過SDS-PAGE分離蛋白質(zhì)后，將其轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素薄膜（NC）或聚偏二氟乙烯膜（PVDF）。隨后，使用脫脂牛奶封閉液進(jìn)行封閉，一抗稀釋液進(jìn)行孵育。蛋白質(zhì)與抗體結(jié)合后，通過洗滌去除未結(jié)合的一抗，接著加入酶標(biāo)記或者熒光標(biāo)記的二抗。最后，利用化學(xué)發(fā)光液或者特定的激發(fā)光源，對(duì)靶蛋白進(jìn)行檢測(cè)，可以通過膠片、化學(xué)發(fā)光儀或熒光成像儀進(jìn)行成像，最終捕捉到蛋白條帶。

　　二、全自動(dòng)毛細(xì)管Digital Western

　　作為創(chuàng)新性毛細(xì)管電泳免疫學(xué)技術(shù)，全自動(dòng)毛細(xì)管Digital Western（也稱Simple Western）將Western Blot技術(shù)和ELISA技術(shù)合二為一，具備傳統(tǒng)WB蛋白質(zhì)可視化定性優(yōu)勢(shì)，同時(shí)具備ELISA免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)精準(zhǔn)定量能力，其靈敏度和精密度符合高標(biāo)準(zhǔn)生物分析要求，可利用超微量樣本實(shí)現(xiàn)內(nèi)源性蛋白質(zhì)精準(zhǔn)定量。自動(dòng)化規(guī)避了傳統(tǒng)WB和SDS-PAGE勞動(dòng)密集型操作引入的人為誤差。僅需要微量樣本（3μL）即可實(shí)現(xiàn)多重蛋白質(zhì)表達(dá)檢測(cè)，節(jié)約珍貴樣品，

　　三、傳統(tǒng)ELISA

　　酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法是一種常用的免疫測(cè)定方法，通常用于定量檢測(cè)樣本中目的蛋白的水平。利用ELISA檢測(cè)的樣本包括血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、細(xì)胞裂解物、唾液、組織裂解物和尿液。ELISA通常在96孔板中進(jìn)行，孔板中包被有一種捕獲特定分析物的抗體。在與實(shí)驗(yàn)樣本、標(biāo)準(zhǔn)品或?qū)φ掌贩跤?，目?biāo)分析物將被這種抗體捕獲。隨后使用結(jié)合到目標(biāo)分析物不同抗原表位的檢測(cè)抗體完成"夾心"結(jié)構(gòu)。接著加入底物溶液，產(chǎn)生的信號(hào)與結(jié)合的分析物量成比例。ELISA有不同形式，包括直接法ELISA、間接法ELISA、夾心法ELISA和競(jìng)爭(zhēng)法ELISA。

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