Elabscience一步法TUNEL原位細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒的常見問題及解決方法有什么

Elabscience® One-step TUNEL In Situ Apoptosis Kit 是一款靈敏度高且能快速簡(jiǎn)便的檢測(cè)細(xì)胞凋亡的產(chǎn)品。本試劑盒適用于組織樣本(石蠟切片、冰凍切片)和細(xì)胞樣本(細(xì)胞涂片、細(xì)胞爬片)的原位凋亡檢測(cè)，檢測(cè)結(jié)果可通過熒光顯微鏡直接觀察。那么你知道Elabscience一步法TUNEL原位細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒的常見問題有什么嗎？該如何解決呢？讓我們一起來看看吧！

一、非特異性染色

原因：

1. TdT酶的濃度過高。

2. TdT酶反應(yīng)時(shí)間過長(zhǎng)或TdT酶反應(yīng)過程中反應(yīng)液滲漏，細(xì)胞或組織表面不能保持濕潤(rùn)。

3. 光照紫外線導(dǎo)致包埋試劑的聚合（如：甲基丙烯酸會(huì)導(dǎo)致樣本DNA的斷裂）。

4. 在固定組織時(shí)樣本 DNA 已斷裂（內(nèi)源核酸酶的作用）。

5. 使用了不適當(dāng)?shù)墓潭ㄒ海缫恍┧嵝怨潭ㄒ骸?/span>

6. 固定后某些核酸酶活性依然較高導(dǎo)致 DNA 斷裂。

解決方法：

1. 用TdT Equilibration Buffer以1:2~1:10稀釋。

2. 注意控制反應(yīng)時(shí)間，并 確保TdT酶反應(yīng)液能很好地覆蓋樣品。

3. 嘗試改用其它包埋材料或其它聚合試劑。

4. 確保樣品取樣后立即固定或通過肝靜脈灌注固定。

5. 采用推薦的固定液。

6. 用含有dUTP和dAPT的溶液封閉。

二、標(biāo)記率低

原因：

1. 如果以乙醇或甲醇固定的樣本則標(biāo)記效率較低（因?yàn)樵诠潭〞r(shí)染色質(zhì)未能與蛋白質(zhì)交聯(lián)，而在操作中丟失）。

2. 固定時(shí)間過長(zhǎng)，導(dǎo)致交聯(lián)程度過高。

3. 石蠟切片脫蠟不充分。

4. 熒光淬滅。

5. 通透條件不佳，以致于試劑不能到達(dá)靶分子或濃度過低。

解決方法：

1. 用溶于 PBS pH7.4中的4%多聚甲醛固定或福爾馬林或戊二醛固定。

2. 減少固定時(shí)間，或用溶于PBS pH7.4的2%多聚甲醛固定。

3. 延長(zhǎng)脫蠟時(shí)間；更換新的脫蠟液。

4. 注意避光操作。

5. 增加通透時(shí)間；優(yōu)化蛋白酶K的作用濃度和作用時(shí)間。

三、組織樣本脫落

原因：

組織樣本被酶從載玻片上消化下來。

解決方法：

降低蛋白酶K的處理時(shí)間。

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