如何提高DNA純度測(cè)定的準(zhǔn)確性？

分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中經(jīng)常需要對(duì)樣本進(jìn)行濃度和純度的測(cè)定，它相當(dāng)于一種質(zhì)控，以此來(lái)確保下游實(shí)驗(yàn)的結(jié)果可靠。那么該如何提高DNA純度測(cè)定的準(zhǔn)確性呢？讓我們一起來(lái)看看吧！

常用的DNA濃度/純度測(cè)定設(shè)備是紫外分光光度計(jì)，它的原理是利用物質(zhì)分子對(duì)紫外可見(jiàn)光譜區(qū)的輻射吸收來(lái)進(jìn)行分析物質(zhì)成分。假設(shè)現(xiàn)在有一樣物質(zhì)A，它溶解在溶液內(nèi)，當(dāng)光照射溶液時(shí)，溶液內(nèi)的A會(huì)吸收一部分的光。不同顏色的光有不同的波長(zhǎng)，A對(duì)不同顏色的光（不同波長(zhǎng)）的吸收程度是不一樣的。

雙鏈的DNA，它能對(duì)波長(zhǎng)為260nm的光進(jìn)行強(qiáng)烈的吸收，吸收的程度可以用一個(gè)叫吸光度的數(shù)值來(lái)測(cè)量，濃度越高的DNA，理論上吸光度也越高。

最后，通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度數(shù)值對(duì)比后，就可以知道未知濃度的DNA有多少量了。

DNA濃度測(cè)定通常會(huì)使用紫外分光光度計(jì)，常見(jiàn)的有NanoDrop這類設(shè)備。除了DNA，它還能測(cè)定RNA和蛋白的吸光度。

要提高濃度測(cè)定的準(zhǔn)確性，需要注意以下幾點(diǎn)：

1. 檢測(cè)之前，務(wù)必充分混勻DNA溶液，因?yàn)檫@類機(jī)器的上樣檢測(cè)體積只需要1-2uL，如果樣品沒(méi)有混勻，那么每次檢測(cè)樣品濃度也會(huì)不一樣。

2. 因?yàn)樯蠘芋w積很小，所以樣品很容易揮發(fā)，如果把樣品加在檢測(cè)基座后不馬上檢測(cè)的話，會(huì)導(dǎo)致測(cè)出來(lái)的樣品濃度偏高。

3. 實(shí)驗(yàn)環(huán)境和耗材的穩(wěn)定性要高。檢測(cè)設(shè)備應(yīng)該在放置在溫度可控、通風(fēng)的環(huán)境下；裝樣品的管子如果不是要進(jìn)行吸取樣品操作的話，需要時(shí)刻緊閉。

4. 每次檢測(cè)完畢，都需要對(duì)檢測(cè)基座或者比色皿進(jìn)行清洗和擦拭，確保不會(huì)有樣品殘留后，再進(jìn)行下一次上樣檢測(cè)。

5. 空白調(diào)零，應(yīng)該使用溶解待檢測(cè)樣品的溶液來(lái)調(diào)零。例如如果用水溶解DNA，那就用水調(diào)零，用其他緩沖液溶解，則用對(duì)應(yīng)的緩沖液調(diào)零。

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